赛默飞世尔科技(以下简称赛默飞)近日最新发布了两篇数据非依赖采集 (DIA) 应用报告，展示了超高场Orbitrap和翻译后修饰的DIA 分析性能。Orbitrap的强大性能使当前最热门的质谱采集技术之一DIA如虎添翼，引领定量蛋白质组学新发展。
应用一：超高分辨质谱一小时 DIA 定量 4000 个 Hela 蛋白
本实验使用Thermo ScientificTM Q Exactiv HF 超高分质谱仪测试了超高场Orbitrap在DIA分析方面的性能。实验使用1小时梯度，分析仅500ng上样量的Hela细胞总蛋白裂解液，重复三针。结果显示，三针DIA分别定量到27558、27604、27483种肽段和4067、4080、4073种蛋白。谱图库中95%的蛋白都获得了可靠的DIA解析(Q<0.01)，灵敏度极高;峰面积CV值<20%的肽段占90.3%，重现性极佳。
应用二：精确修饰位点谱图库的建立与磷酸化蛋白质组的 DIA 解析
PTM位点鉴定错误的概率较高，将位点错误的鉴定结果作为谱图库，会导致DIA解析结果的不可靠。实验使用Thermo ScientificTM Orbitrap Fusion三合一质谱仪，基于ptmRS/phosphoRS建立可靠的翻译后修饰DIA流程，突破了PTM DIA解析的瓶颈。使用phosphoRS/ptmRS筛选PTM定位准确的谱图，作为谱图库用于DIA，结果显示，具有精确PTM定位的谱图库中98.4%的磷酸化肽都获得了可靠的DIA解析(Q<0.01)，峰面积CV值<20%的肽段占86.9%，实现了准确可靠的大规模PTM DIA定量。
