高效液相色谱仪主要的组成部件为高压输液泵、进样装置、色谱柱、检测器和色谱数据处理装置。
1.高压输液泵
由于高效液相色谱所使用的色谱柱一般装填小于10μm的固定相颗粒，故对流动相有较大的阻力，所以对于泵的耐压有一定的要求。除此之外，对于输液泵还有泵体材料耐化学腐蚀、输出流量范围宽、输出流量稳定等要求。
高压输液泵可以分为恒压泵和恒流泵两大类。
恒压泵是指输出恒定压力的泵，当系统阻力不变时可以保持恒定流量，但系统阻力发生变化时，就会影响到系统流量稳定，因此现在基本已不使用。恒流泵是指可输出恒定体积流量的泵，又分为注射型泵和往复式柱塞泵两类。注射型泵由于其工作过程中需停流吸液以及价格昂贵等原因，目前基本不用于高效液相色谱仪中。往复式柱塞泵则可以提供低脉动的连续稳定液流，广泛应用于各种商品化仪器中，并衍生出了双柱塞往复式并联泵、双柱塞往复式串联泵、双柱塞独立驱动的往复式串联泵等多种设计。
2.进样装置
在HPLC分析中由于使用了高效颗粒填料和高压的流动相，因而对样品的进样方式要求提高，需要使样品在进入色谱柱头时准确地注人其上端填料的中心，形成集中的一点，以保证扩散效应影响降到最低。为实现以上要求有两种设计：停流进样和六通阀进样，但现在停流进样技术已经完全被简单易用的六通阀进样方式所取代。
3.色谱柱
色谱柱一般使用内壁抛光的直型不锈钢管作为柱管以获得高柱效。当使用粗内径短柱和细内径色潜柱时，需要注意柱外效应所引起的色谱峰展宽，应该尽量缩短进样器至检测器之间的连接管路，以获得更小的柱外死体积。
HPLC色谱柱装填的固定相，其基体材料多为全多孔球形或无定形的硅胶颗粒，在高压下使用匀浆装柱法装填，并在色谱柱两端使用多孔不锈钢烧结材料的过滤片以阻挡流动相中的微小机械杂质进入，并防止固定相流失。
4.检测器
检测器主要用于检测经色谱柱分离后的组分浓度变化。常用的检测器为紫外/可见光检测器、荧光检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器等。
5.色谱数据处理装置
高效液相色谱的分析结果数据现已广泛使用色谱数据工作站来记录和处理。色谱工作站基于微型计算机的硬件，可以实现如下功能：
(1) 仪器操作参数的控制功能——色谱仪的所有可控参数，均可预先设定并保存记录，在运行样品时自动调用并传输至仪器。
(2) 数据采集和处理功能——可通过计算机和仪器之间的数据传输接口自动采集色谱数据。并根据指定处理参数进行数据处理，提供色谱图的相关积分数据，还可以选择不同的标准计算方式来对样品自动进行计算，得到定性或定量的结果。还具有计算柱效、绘制工作曲线等其他功能。
(3) 计量认证功能——通过工作站完成对仪器的自动认证程序，包括流量精度、色谱柱控温精度、检测器能量检测等多项参数，并提供详细的计量报告。 .
(4) 多台仪器的自动控制——可以适时控制多套HPLC、系统，并同时独立进行方法设定、样品运行、数据采集处理。
